解答：ELISA試驗時稀釋工作的必要性
點擊次數(shù)：1116 更新時間：2018-12-17
在進行ELISA試驗時，我們需要將ELISA實驗的樣本進行稀釋工作，這時就會有人來問，為什么ELISA實驗的樣本都要進行稀釋工作，接下來小編就為大家解答一下。
原因一：競賽抑制比較顯著，應(yīng)稀釋競賽物；
原因二：以下降非特異性反響，使特異性的抗原抗體反響充分體現(xiàn)出來。血清稀釋用一般的PBS即可，可加1％的BSA，能有用下降ELISA本底，當然假如你嫌費事我覺得用生理鹽水代替PBS關(guān)系也不大。不論你是用直接競賽仍是直接競賽，血清的稀釋倍數(shù)肯定要事前斷定，但也不必一點點，你做一個預(yù)試驗即可，挑選OD在1.0左右的稀釋倍數(shù)，即你的競賽ELISA中陰性孔OD在1.0，這樣作出來的曲線比較敏感。
ELISA試劑盒試驗稀釋血清的過程：
先把蛋白稀釋必定的倍數(shù)，比如說10倍、20倍稀釋（這樣能夠大體斷定一個參數(shù)），將抗原進行一系列稀釋包被微量反響板，再用必定稀釋度的陽性參閱血清和陰性參閱血清進行孵育后洗刷，再加酶結(jié)合物進行反響，經(jīng)孵育洗刷后，加底物溶液顯色，停止反響后別離測定O.D值，挑選O.D值≥1.0的那個抗原稀釋度為zui適包被濃度。一般總是要挑選那個O.D值稍大于1.0，而不挑選小于1.0的抗原濃度。陰性參閱血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參閱血清和陰性參閱血清的O.D值有顯著不同。
除此之外，ELISA試驗中還會遇到各種各樣的問題，作為實驗者需要及時找出處理的方法，包括：
1、洗板：1）采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉；2）反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長；
3）采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。
解決方法：1）保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干；2）合理安排，或多用幾臺洗板機。
2、顯色：1）加顯色劑時濺出孔外造成液體回流；2）顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑。
解決方法：1）加樣時保持顯色劑不外流；2）顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。
3、終止：可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
4、讀板：如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸；盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質(zhì)量。
