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優(yōu)化ELISA信號放大效果需結(jié)合多種技術(shù)手段，以下是關(guān)鍵方法及其應(yīng)用場景：
生物素-親和素系統(tǒng)（BAS）
利用生物素與親和素的高親和力（每個親和素可結(jié)合4個生物素）實(shí)現(xiàn)多級放大。常見形式包括：
?BAB-ELISA?：生物素化抗體與酶標(biāo)親和素結(jié)合，信號強(qiáng)度提升3.6倍。
?ABC-ELISA?：通過橋聯(lián)親和素和酶標(biāo)生物素進(jìn)一步放大信號，靈敏度比常規(guī)ELISA高25倍。
酶促放大技術(shù)
通過高活性酶（如HRP、ALP）催化底物反應(yīng)，顯著增強(qiáng)信號強(qiáng)度。例如，辣根過氧化物酶（HRP）催化TMB顯色，可提升檢測靈敏度10-100倍。優(yōu)化包被條件（如緩沖液pH、孵育時間）和選擇高親和力抗體是基礎(chǔ)。
超敏ELISA技術(shù)
?TSA超敏試劑盒?：結(jié)合生物素化酪胺（B-T）和鏈霉親和素-HRP（SA-HRP），檢測限達(dá)飛克級（如IL-6）。
?磁珠固相載體?：減少非特異性干擾，提升信噪比。
其他優(yōu)化策略
?嚴(yán)格洗滌步驟?：降低背景干擾，提高特異性。
?樣本濃縮?：通過離心或超濾提高低豐度目標(biāo)物濃度。
?封閉劑優(yōu)化?：測試不同封閉劑（如BSA、脫脂奶粉）以平衡背景與信號強(qiáng)度。
這些技術(shù)通過特異性結(jié)合與信號放大協(xié)同作用，顯著提升了ELISA在臨床診斷和科研中的檢測性。
